液相色谱仪HPLC

　　液相色谱仪利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。

　　高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
 

　　按作用原理分类：

　　1、吸附柱色谱法

　　2、分配柱色谱法

　　3、离子交换柱色谱法

　　4、凝胶柱色谱法
 

　　特点：

　　1.高压：液相色谱法以液体为流动相(称为载液)，液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。

　　2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。

　　3. 高效：HPLC的分离效率高于普通液相色谱，在发展过程中又出现了许多新型固定相，使分离效率大大提高。

　　4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般微升。

　　5. 适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
 

　　流动相及样品的制备要求：

　　1.高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤，且流动相需要定期更换。

　　2.流动相脱气至关重要(可采用抽滤，超声波脱气等方法);

　　3.样品溶解后，用0.22微米的有机系膜或者水系膜过滤。
 

　　高压恒流泵的维护和保养：

　　1.高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度升高，最好每次升高0.2mL/min，当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

　　2.特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇或甲醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。

　　3.在仪器使用完了以后，要及时清洗管路并冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。
 

　　色谱柱的维护和保养：
 

　　1.所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.22um薄膜过滤，而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

　　2.所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.22um水膜过滤后使用，所有试液均现用现配。并且在进样的样品都必须经过0.22um薄膜针筒过滤后进样。

　　3.所使用到的最大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

　　4.仪器检测完，需要用流动相梯度洗脱色谱柱1小时以上。
 

　　工作站的维护：

　　出现死机可重启计算机;不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。